Analiza porównawcza typu probówek i warunków przechowywania materiału do nieinwazyjnych badań grupy krwi płodu z wolnokrążącego DNA płodowego
Streszczenie
Wstęp. Stabilność kwasu deoksyrybonukleinowego (DNA) płodowego w osoczu ciężarnej i zahamowanie uwalniania się z komórek DNA matczynego są kluczowe dla uzyskiwania wiarygodnych wyników nieinwazyjnych badań prenatalnych antygenów krwi płodu w konfliktach serologicznych.
Cel. Analiza porównawcza nieinwazyjnej diagnostyki konfliktów matczyno-płodowych wykonywanej z probówek obecnie używanych w Instytucie Hematologii i Transfuzjologii (IHiT) z probówkami przeznaczonymi do badań wolnokrążącego DNA stabilizującymi frakcję komórkową matki.
Materiał i metody. Krew 29 kobiet ciężarnych RhD ujemnych pobierano równolegle do probówek na EDTA z barierą żelową (BD Vacutainer PPT, USA) i do probówek Cell-Free DNA Collection (Roche). Z tych ostatnich DNA izolowano od razu po pobraniu (n = 18), w 48–96 godzin po przechowywaniu próbówek w temperaturze pokojowej (n = 24), lub po mrożeniu frakcji osocza odseparowanego od razu po pobraniu (n = 27). W DNA z osocza izolowanego przy użyciu ekstraktora easyMag (Biomerieux) prowadzono amplifikacje fragmentów genów płodu — metodą real-time PCR przy zastosowaniu aparatu LC480II (Roche).
Wyniki. Uzyskane różnice w stężeniu frakcji DNA płodowego były nieistotne statystycznie we wszystkich porównywanych grupach (p > 0,05). Frakcja całkowitego DNA izolowanego z osocza z probówek przeznaczonych do badań wolnokrążącego DNA badanych do 24 godzin po pobraniu (p = 0,03) oraz z mrożonego osocza (p = 0,03) była statystycznie niższa niż dla materiału z probówek rutynowo stosowanych do NIPT w IHiT.
Wnioski. Rodzaj zastosowanych probówek do pobierania krwi nie ma wpływu na poziom wykrywanej frakcji DNA płodowego, ale pobranie krwi do probówek przeznaczonych do badań wolnokrążącego DNA i jej przechowywanie w temperaturze pokojowej do 96 godzin zapobiega rozpadowi komórek matki, co pozwala rekomendować ten system pobrań do badań antygenów komórek krwi płodu z osocza ciężarnej prowadzonych w IHiT.
Słowa kluczowe: wolnokrążące DNA płodowenieinwazyjne badania prenatalneantygeny krwinki czerwonej i płytkowej
Referencje
- Lo YM, Corbetta N, Chamberlain PF, et al. Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum. Lancet. 1997; 350(9076): 485–487.
- Guz K, et al. Nieinwazyjna prenatalna diagnostyka molekularna. W: Bal J. (red.). Genetyka Medyczna i Molekularna. PWN, Warszawa. ; 2017: 193–203.
- Orzińska A, Guz K, Dębska M, et al. 14 Years of Polish Experience in Non-Invasive Prenatal Blood Group Diagnosis. Transfus Med Hemother. 2015; 42(6): 361–364.
- Daniels G, Finning K, Lozano M, et al. Vox Sanguinis International Forum on application of fetal blood grouping: summary. Vox Sang. 2018; 113(2): 198–201.
- van der Schoot CE, de Haas M, Clausen FB. Genotyping to prevent Rh disease: has the time come? Curr Opin Hematol. 2017; 24(6): 544–550.
- https://www.infor.pl/dziennik-ustaw/r2017/p1766.
- Clausen FB, Jakobsen TR, Rieneck K, et al. Pre-analytical conditions in non-invasive prenatal testing of cell-free fetal RHD. PLoS One. 2013; 8(10): e76990.
- Norton SE, Lechner JM, Williams T, et al. A stabilizing reagent prevents cell-free DNA contamination by cellular DNA in plasma during blood sample storage and shipping as determined by digital PCR. Clin Biochem. 2013; 46(15): 1561–1565.
- Müller SP, Bartels I, Stein W, et al. Cell-free fetal DNA in specimen from pregnant women is stable up to 5 days. Prenat Diagn. 2011; 31(13): 1300–1304.
- Reid ME. Rh Blood Group System. W: Reid M.E., Lomas-Francis C., Olsson M. (red.). The blood group antigen. Wyd. 3. Elsevier Ltd. : London.
- Rieneck K, Bak M, Jønson L, et al. Next-generation sequencing: proof of concept for antenatal prediction of the fetal Kell blood group phenotype from cell-free fetal DNA in maternal plasma. Transfusion. 2013; 53(11 Suppl 2): 2892–2898.
- Wienzek-Lischka S, Krautwurst A, Fröhner V, et al. Noninvasive fetal genotyping of human platelet antigen-1a using targeted massively parallel sequencing. Transfusion. 2015; 55(6 Pt 2): 1538–1544.
- Page-Christiaens L., Klein H.-G. Noninvasive Prenatal Testing (NIPT). Elsevier Inc., London 2018.
