Transient warming events and cryogenic

Streszczenie

Wstęp: Określenie Transient Warming Events (TWEs) oznacza krótkie okresy ekspozycji zamrożonych komórek na temperaturę otoczenia, w trakcie rutynowych czynności laboratoryjnych. Celem pracy była ocena wpływu wielokrotnych TWEs na wybrane parametry zamrożonych jednostek krwi pępowinowej (UCB) przechowywanych w New Jersey Community Blood Center (NJCBC). Wykorzystano znane metody oceny i odzysku komórek, ich żywotności i zdolności klonogennych. Materiał i metody: Jednostki UCB pobierano za zgodą dawców i poddawano preparatyce zgodnie z obowiązującymi procedurami (SOP, standard operating procedures). Każdą z nich dzielono na dwie 25-mililitrowe próbki, mrożono w urządzeniu do kontrolowanego zamrażania i przechowywano < –180°C. Próbki badane poddawano 10-krotnej ekspozycji na temperaturę pokojową, aż do uzyskania temperatur docelowych (–110°C , –80°C). Próbki kontrolne przechowywano w stałej temperaturze poniżej –180°C. Następnie próbki badane i kontrolne rozmrażano równocześnie w urządzeniu do suchego rozmrażania w temperaturze 37°C. W każdej próbce oceniano całkowitą liczbę komórek jądrzastych (TNC, total nucleated cell count), liczbę komórek CD34+, żywotność komórek oraz liczbę jednostek tworzących kolonie (CFU, colony forming units). Wyniki: W próbkach poddanych 10-krotnemu działaniu temperatury pokojowej aż do osiągnięcia docelowej temperatury –110°C stwierdzono 1,5-procentowe zmniejszenie TNC, 3,5-procentowe zmniejszenie liczby komórek CD34+ oraz 2-procentowe zmniejszenie całkowitej liczby CFU. Nie zaobserwowano strat w żywotności komórek. Różnice między próbkami badanymi a kontrolnymi w zakresie badanych parametrów nie były statystycznie istotne. Różnice pomiędzy próbkami badanymi poddanymi 10-krotnemu działaniu temperatury pokojowej, aż do osiągnięcia temperatury –80°C a próbkami kontrolnymi również nie były statystycznie istotne pod względem liczby TNC, liczby komórek CD34+ i żywotności; całkowita liczba CFU w próbkach badanych była niższa o 8%, co było statystycznie istotne. W NJCBC jednorazowa ekspozycja jednostek UCB na temperaturę pokojową nie przekracza 1 min, a uzyskanie temperatury –110°C trwa około 3,5 minuty. Wnioski: Wyniki naszych badań wykazują, że wielokrotna, kontrolowana ekspozycja zamrożonych jednostek UCB w trakcie rutynowych czynności laboratoryjnych, nie wywiera szkodliwego wpływu na jakość biologiczną preparatów. Uzyskane przez nas wyniki powinny zachęcić inne ośrodki do prowadzenia własnych badań nad wpływem TWE na jakość poszczególnych rodzajów komórek przechowywanych w stanie zamrożenia oraz stosowanych metod zamrażania i rozmrażania. Dopiero wówczas można podejmować decyzje o zakupie wysoce specjalistycznego sprzętu chłodniczego z zamiarem obniżenia liczby TWE